293無血清培養(yǎng)基使用之細(xì)胞復(fù)蘇方法

　　293無血清培養(yǎng)基使用之細(xì)胞復(fù)蘇，小編為您介紹細(xì)胞復(fù)蘇的流程：

　　1）迅速取出凍存的細(xì)胞，在37℃水浴條件下進(jìn)行解凍（可以在水中輕輕晃動，時(shí)間控制在60s以內(nèi)）；

　　2）輕輕地混勻細(xì)胞并將融化的細(xì)胞全部移至15ml無菌離心管中，逐滴加入10ml預(yù)熱到37℃的培養(yǎng)基，離心換液（100g，5min）去除全部上清，加入新鮮培養(yǎng)基重懸，使得細(xì)胞密度達(dá)到0.4-0.66cells/ml；

　　3）將細(xì)胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；

　　4）2-4天后通過人工或儀器測定細(xì)胞的密度及活率，如果細(xì)胞密度達(dá)到1.0*106cells/ml，活率達(dá)到85%以上則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)；

　　5）如果細(xì)胞密度低于1.0*106cells/ml，則建議對細(xì)胞進(jìn)行離心（100g，5min），然后重懸于20-30ml的新鮮培養(yǎng)基中使得細(xì)胞密度為0.4-0.6*106cells/ml左右，并繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞正常生長則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　293無血清培養(yǎng)基描述：

　　Balance CD 293 培養(yǎng)基適用于懸浮培養(yǎng)條件下的HEK293細(xì)胞（如293-F,293-T, Expi-293F等）的高密度生長和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)。 Balance CD 293 培養(yǎng)基含有細(xì)胞生長所需的全部營養(yǎng)成份，無需添加任何添加物即可使用。（注意：此培養(yǎng)基不包含抗生素以及血清）

　　293無血清培養(yǎng)基特點(diǎn):

　　瞬時(shí)轉(zhuǎn)染專用培養(yǎng)基，適用于HEK293細(xì)胞高密度懸浮培養(yǎng)

　　無蛋白、無動物源、化學(xué)成分限定

　　即用型*培養(yǎng)基,無需添加額外成分

　　以上為293無血清培養(yǎng)基使用之細(xì)胞復(fù)蘇的方法，如需了解更多請聯(lián)系創(chuàng)凌生物！

　　產(chǎn)品使用方法：

　　細(xì)胞馴化

　　1）直接馴化

　　大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細(xì)胞，可以直接適應(yīng)Balance CD 293 medium，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

　　2）漸進(jìn)式馴化

　　注意：選用低代次、處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行馴化

　　①在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細(xì)胞生長穩(wěn)定，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到2x10 6 cells/ml后進(jìn)行傳代，傳代細(xì)胞密度控制在0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為75:25；

　　②將細(xì)胞置于37℃，5% CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)；

　　③當(dāng)細(xì)胞密度3-4天后達(dá)到3x10 6 cells/ml且細(xì)胞活率>90%，傳代時(shí)5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為50:50，細(xì)胞密度控制在0.5×10 6 cells/mL。如細(xì)胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養(yǎng)基，加入80%的5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；

　　④重復(fù)步驟③逐步增加Balance CD 293培養(yǎng)基所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90）直到100%的Balance CD 293培養(yǎng)基；

　　⑤經(jīng)過在100%的 Balance CD 293 培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)，傳代后3-4天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2-3×10 6  cells/mL，細(xì)胞活率大于90%，這說明細(xì)胞已經(jīng)*適應(yīng)了Balance CD 293 培養(yǎng)基。之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞的起始密度可以降到0.3×10 6 cells/mL，一般傳代2-3次后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

　　注意: 一般細(xì)胞馴化過程中，前三代細(xì)胞的狀態(tài)可能不是很好，但一般從第四代狀態(tài)會有改善。

　　細(xì)胞傳代

　　1）取細(xì)胞培養(yǎng)樣品，人工或儀器測定細(xì)胞密度以及活率；

　　2）計(jì)算傳代所需的細(xì)胞用量，建議起始細(xì)胞密度為0.2-0.4×10 6 cells/mL。建議復(fù)蘇的細(xì)胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議為15-20 mL（100 mL的培養(yǎng)瓶）或50-60 mL（250 mL 的培養(yǎng)瓶）；

　　3）將細(xì)胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng)，3-4天傳代一次。

　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染在Balance CD 293培養(yǎng)基中，采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑（例如 Gibco 293Fectin?ExpiFectamine? 293 Transfection Kit ）或 PEI 可以實(shí)現(xiàn)對 HEK293 細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。