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        甲基化檢測(cè)分子生物技術(shù)服務(wù)

        甲基化檢測(cè)分子生物技術(shù)服務(wù)

        型號(hào):   更新時(shí)間:2024-11-09

        簡(jiǎn)要描述:

        甲基化檢測(cè)分子生物技術(shù)服務(wù) DNA甲基化存在于大多數(shù)真核生物中,一般發(fā)生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區(qū),起調(diào)控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化,20%處于基因調(diào)控區(qū)的CpG島中。

        品牌上海創(chuàng)凌供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途通過對(duì)疾病及正常對(duì)照樣本的靶基因進(jìn)行甲基化分析,在研究腫瘤發(fā)生機(jī)制及早期診斷等方應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè)

        甲基化檢測(cè)分子生物技術(shù)服務(wù)介紹

        DNA甲基化存在于大多數(shù)真核生物中,一般發(fā)生在CpG雙核苷酸中胞嘧啶的5’UTR區(qū),起調(diào)控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化,20%處于基因調(diào)控區(qū)的CpG島中。BSP甲基化測(cè)序(Bisulfite Genomic Sequencing PCR)的原理通過對(duì)基因組DNA進(jìn)行重亞硫酸鹽處理,非甲基化的胞嘧啶被脫氨基而轉(zhuǎn)變成尿嘧啶,在隨后的PCR反應(yīng)中尿嘧啶轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不能被脫氨基,在反應(yīng)完成時(shí)被保留,我們將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行TA克隆測(cè)序,就可以分析甲基化發(fā)生的具體情況。該方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性高,是甲基化檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。通過對(duì)疾病及正常對(duì)照樣本的靶基因進(jìn)行甲基化分析,在研究腫瘤發(fā)生機(jī)制及早期診斷等方面均具有重要的臨床意義。

        甲基化檢測(cè)分子生物技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程

         

         

        Q:常見的甲基化測(cè)定方法有哪些,優(yōu)缺點(diǎn)是什么?

         

        常見方法

        優(yōu)缺點(diǎn)

        MSP法(Methylation-specific PCR,MSP):重亞硫酸鹽處理基因組DNA,分別設(shè)計(jì)針對(duì)甲基化和非甲基化序列的引物進(jìn)行PCR。通過電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物,如果對(duì)甲基化DNA鏈的引物能得到擴(kuò)增片段,則說明該位點(diǎn)存在甲基化;反之,說明被檢測(cè)的位點(diǎn)不存在甲基化。

        無需挑克隆測(cè)序,步驟簡(jiǎn)單,但對(duì)引物設(shè)計(jì)的要求較高,容易出現(xiàn)PCR假陽性,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

        BSP法(Bisulfite sequencing PCR ,BSP):重亞硫酸處理基因組DNA,設(shè)計(jì)BSP引物擴(kuò)增,將PCR產(chǎn)物克隆至T載體測(cè)序,分析CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。

        可明確樣本待測(cè)區(qū)段每個(gè)CG位點(diǎn)的甲基化程度;受實(shí)驗(yàn)方法和價(jià)格因素限制無法高通量。

        高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting ,HRM):重亞硫酸處理基因組DNA,未甲基化的胞嘧啶經(jīng)PCR擴(kuò)增后轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,導(dǎo)致樣品中的GC含量發(fā)生改變后溶解溫度變化,從而進(jìn)行分析。

        檢測(cè)方法高通量,但是無法明確每個(gè)CG位點(diǎn)的甲基化程度。

         

        客戶須知:

         

        實(shí)物

        數(shù)據(jù)信息

        實(shí)驗(yàn)周期

        客戶提供

        待測(cè)樣本

        待測(cè)序列信息

        7周或以上

        我們提供

        基本實(shí)驗(yàn)步驟、測(cè)序報(bào)告、圈點(diǎn)圖

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