SILAC-細胞差異蛋白質(zhì)組分析服務

一、SILAC-細胞差異蛋白質(zhì)組分析服務簡介

SILAC（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture）是基于哺乳動物細胞生長對“必需氨基酸”的依賴原理，將穩(wěn)定同位素（13C、15N）標記的Lys（K）和Arg（R）加入細胞培養(yǎng)基中對細胞進行培養(yǎng)。在細胞的增殖過程中，穩(wěn)定同位素標記的K和R自然“摻入”到蛋白質(zhì)中，從而在細胞中所有的蛋白質(zhì)上引入了質(zhì)量標簽（Mass Tag，3-10Da）。借助后續(xù)MS的高分辨率，在MS層面上，實現(xiàn)對蛋白質(zhì)水平進行高精度定量的技術(shù)。

SILAC技術(shù)基本的應用是做細胞/細胞亞組分（細胞質(zhì)、細胞核、線粒體、外泌體等）的各種蛋白質(zhì)表達差異譜分析。此外，（1）使用SILAC技術(shù)標記小鼠、酵母、大腸桿菌、果蠅、線蟲等模式生物，從而可以借助MS直接定量比較動物個體的蛋白質(zhì)組差異（SILAM）；（2）利用SILAC技術(shù)，借助細胞株，通用可以分析人體的不同組織的蛋白質(zhì)表達譜差異（super-SILAC）；（3）SILAC結(jié)合IP-MS（免疫沉淀-質(zhì)譜）可定量分析蛋白質(zhì)互作/翻譯后修飾的定量分析（SILAC+IP-MS）。

SILAC技術(shù)的優(yōu)勢體現(xiàn)在（1）直接通過細胞代謝，實現(xiàn)對整個細胞蛋白質(zhì)組的標記，從實驗的源頭引入質(zhì)量標簽（Mass tag），實驗的系統(tǒng)誤差顯著降低；（2）實驗步驟簡單，只要將SILAC標記的和非標記的蛋白質(zhì)1:1混合，就能進行后續(xù)MS分析；（3）定量準確度更高，定量信息豐富。

二、SILAC-細胞差異蛋白質(zhì)組分析服務服務方案

（一）整體服務：

只需客戶提供細胞即可，我方負責完成：

SILAC培養(yǎng)基制備。

細胞SILAC標記及標記效率MS檢測；

SILAC標記細胞與非標記細胞擴增；

蛋白質(zhì)提取、分離（SDS-PAGE）及染色；

切割條帶，分別進行LC-MS測試；

MS數(shù)據(jù)分析，完成蛋白質(zhì)的鑒定及定量分析，篩選差異表達蛋白；

差異表達蛋白常規(guī)生物信息學分析；

我方同樣有技術(shù)實力進行具體蛋白質(zhì)（經(jīng)用SILAC實驗篩選、驗證后的蛋白）的功能實驗。如有需求，方案另議。

（二）合作共贏方案：

原則是通過協(xié)商簽訂合同，雙方各完成一部分實驗內(nèi)容。

客戶方需從我方購買相應的SILAC培養(yǎng)基及耗材。我方提供細胞SILAC標記的實驗方案，協(xié)助客戶完成細胞的SILAC標記過程。

標記完成后，需用LC-MS鑒定細胞標記效率。該步驟需交由我方完成鑒定。

正式實驗的蛋白質(zhì)樣品，需交由我方完成MS鑒定和定量分析。

三、其他特色：

SILAC培養(yǎng)基。我方能生產(chǎn)多種類型的SILAC培養(yǎng)基（K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等），7-10個工作日發(fā)貨，免去客戶從國外進口SILAC培養(yǎng)基及其標記氨基酸的漫長貨期。

SILAC培養(yǎng)基，500ml起訂。

我方同時銷售SILAC相關的試劑/耗材（dialyzed FBS，filter等），歡迎咨詢。

四、客戶發(fā)表的代表性論文：

Analytical chemistry 2017, 89(19):10248-10255. 

Analytical chemistry 2017, 89(21):11468-11475.

Journal of proteome research 2013, 12(5):2055-2066.

Amino acids 2014, 46(4):841-852.